Mid ka mid ah faa'iidooyinka ugu muhiimsan ee dhaqanka unuggu waa awoodda lagu maamulo kimisteriga jireed ee taranka unugyada (ie heerkulka, pH, cadaadiska osmotic, O2 iyo CO2 kacsanaanta) iyo deegaanka physiological (ie hormoonka iyo xoogga nafaqeynta).Marka lagu daro heerkulka, deegaanka dhaqanka waxaa gacanta ku haya dhexdhexaadiyaha koritaanka.
Inkasta oo deegaanka jireed ee dhaqanku aanu ahayn mid cad sida deegaanka jireed iyo kiimikaad, faham wanaagsan oo ku saabsan qaybaha serum, aqoonsiga qodobbada koritaanka ee looga baahan yahay fidinta, iyo faham wanaagsan oo ku saabsan deegaanka yar ee unugyada dhaqanka.(Tusaale isdhexgalka unug-unug, fidinta gaaska, la falgalka shaxanka) hadda waxay ogolaataa in qaar ka mid ah xadhkaha unugyada lagu dhaqo warbaahinta aan serumka lahayn.
1.Deegaanka dhaqanku wuxuu saameeyaa koritaanka unugyada
Fadlan ogow in xaaladaha dhaqanka unugyadu ay ku kala duwan yihiin nooc kasta oo unug.
Cawaaqibta ka dhalan karta ka leexashada xaaladaha dhaqameed ee looga baahan yahay nooc unug gaar ah waxay u dhexeeyaan muujinta phenotypes aan caadi ahayn ilaa guuldarada buuxda ee dhaqanka unugga.Sidaa darteed, waxaan kugula talineynaa inaad barato khadka gacanta ee aad xiisaynayso oo aad si adag u raacdo tilmaamaha lagu siiyay badeecad kasta oo aad ku isticmaasho tijaabadaada.
2. taxadarka abuuritaanka jawi dhaqameedka unugyada la hagaajiyay ee unugyadaada:
Warbaahinta dhaqanka iyo serum (hoos ka eeg macluumaad dheeraad ah)
pH iyo CO2 (hoos ka eeg macluumaad dheeraad ah)
Beero balaastiig (hoos ka eeg macluumaad dheeraad ah)
Heerkulka (hoos ka eeg macluumaad dheeraad ah)
2.1 Warbaahinta Dhaqanka iyo Serum
Dhexdhexaadinta dhaqameedku waa qaybta ugu muhiimsan ee deegaanka dhaqanka, sababtoo ah waxay bixisaa nafaqooyinka, arrimaha koritaanka iyo hormoonnada loo baahan yahay koritaanka unugyada, waxayna nidaamisaa pH iyo cadaadiska osmotic ee dhaqanka.
Inkasta oo tijaabooyinka dhaqameed ee bilawga ah ee unugyada lagu sameeyay iyada oo la adeegsanayo warbaahinta dabiiciga ah ee laga helay unugyada unugyada iyo dareeraha jidhka, baahida loo qabo jaangooyooyinka, tayada warbaahinta, iyo baahida korodhka ah ayaa horseeday horumarinta warbaahin qeexan.Saddexda nooc ee aasaasiga ah ee warbaahintu waa basal media, warbaahinta serum oo la dhimay iyo warbaahinta serum-ka, waxayna leeyihiin shuruudo kala duwan oo loogu talagalay kabidda serum.
2.1.1 Dhexdhexaadinta aasaasiga ah
Dhaqanka unugga Gibco dhexdhexaad ah
Inta badan xadadka unuggu waxay si fiican ugu koraan warbaahinta aasaasiga ah ee ka kooban amino acids, fitamiino, cusbada aan organic ahayn, iyo ilaha kaarboonka (sida gulukooska), laakiin hababkan aasaasiga ah ee warbaahinta waa in lagu kabo serum.
2.1.2 Dhexdhexaadka serum oo la dhimay
Dhalo leh Gibco Low Serum Medium
Istaraatiijiyad kale oo lagu yareeynayo saameynta xun ee serum ee tijaabooyinka dhaqanka unugga waa in la isticmaalo warbaahinta la dhimay serum.Dhexdhexaadinta serum ee la dhimay waa qaacido dhexdhexaad ah oo aasaasi ah oo hodan ku ah nafaqooyinka iyo arrimo ka soo jeeda xayawaanka, taas oo yareyn karta xaddiga serum ee loo baahan yahay.
2.1.3 dhexdhexaad ah Serum-free
Dhalo leh dhexdhexaad ah serum-free Gibco
Dhexdhexaadinta aan Serum-ka lahayn (SFM) waxay hareer martaa isticmaalka serumka xoolaha iyadoo ku beddesha serum nafaqo habboon iyo habayn hormoonno.Dhaqamada aasaasiga ah oo badan iyo khadadka unuggu waxay leeyihiin qaabab dhexdhexaad ah oo aan lahayn serum, oo ay ku jiraan Shiinaha Hamster Ovary (CHO) khadka soosaarka borotiinka ee dib u habeynta, khadadka unugyada hybridoma ee kala duwan, khadadka cayayaanka Sf9 iyo Sf21 (Spodoptera frugiperda), iyo sidoo kale martigeliyaha wax soo saarka fayraska (tusaale ahaan, 293, VERO, MDCK, MDBK), iwm. Mid ka mid ah faa'iidooyinka ugu muhiimsan ee isticmaalka dhexdhexaadka ah ee serum-free waa awoodda lagu sameeyo dhexdhexaadinta xulashada noocyada unugyada gaarka ah iyadoo la dooranayo isku-dhafka habboon ee arrimaha koritaanka.Shaxdan soo socotaa waxay taxaysaa faa'iidooyinka iyo khasaarooyinka ay leedahay warbaahinta aan serumka lahayn.
Faa'iidada
Kordhi caddaynta
Waxqabad dheeraad ah oo joogto ah
Sifeyn fudud iyo habayn hoose
Si sax ah u qiimee shaqada unugga
Kordhi wax soo saarka
Xakamaynta wanaagsan ee falcelinta jireed
Ogaanshaha warbaahinta unugga oo la xoojiyey
Khasaaro
Nooca unugga shuruudaha qaacidada dhexdhexaadka ah ee gaarka ah
Waxay u baahan tahay nadiifin reagent sare leh
Koritaanka oo gaabis ah
2.2.1 heerka pH
Inta badan xadadka unugyada naasleyda ee caadiga ah waxay si fiican ugu koraan pH 7.4, farqiga u dhexeeya xadadka unugga ee kala duwanna waa yar yihiin.Si kastaba ha noqotee, qaar ka mid ah khadadka unugyada la beddelay ayaa la muujiyay inay si ka sii wanaagsan u koraan jawi yar oo acidic ah (pH 7.0 - 7.4), halka qaar ka mid ah khadadka unugyada fibroblast ee caadiga ah ay door bidaan jawi yar oo alkaline ah (pH 7.4 - 7.7).Xadhkaha unugyada cayayaanka sida Sf9 iyo Sf21 waxay si fiican ugu koraan pH 6.2.
2.2.2 CO2 heerka
Dhexdhexaadka korriinka ayaa koontaroolaya pH-ka dhaqanka wuxuuna ilaaliyaa unugyada dhaqanka si ay uga hortagaan isbeddelada pH.Caadi ahaan, kaydintan waxa lagu gaaraa iyada oo ka kooban organic (tusaale, HEPES) ama kaydiyaha ku salaysan CO2-bicarbonate.Sababtoo ah pH ee dhexdhexaadka ah waxay ku xiran tahay dheelitirnaanta jilicsan ee kaarboon dioxide (CO2) iyo bicarbonate (HCO3-), isbeddelka jawiga CO2 ayaa bedeli doona pH ee dhexdhexaadka ah.Sidaa darteed, marka la isticmaalayo baraf dhexdhexaad ah oo leh CO2-bicarbonate-ku-salaysan bakhaar, waxaa lagama maarmaan ah in la isticmaalo CO2 exogenous, gaar ahaan marka lagu dhaqo unugyada suxuunta dhaqanka furan ama dhaqangelinta khadadka gacanta ee isbeddelka sare leh.Inkasta oo cilmi-baarayaasha intooda badani ay inta badan isticmaalaan 5-7% CO2 hawada, inta badan tijaabooyinka dhaqanka unuggu waxay isticmaalaan 4-10% CO2.Si kastaba ha ahaatee, dhexdhexaadiye kastaa wuxuu leeyahay CO2 lagu taliyey iyo xoojinta bicarbonate si loo gaaro pH saxda ah iyo cadaadiska osmotic;Macluumaad dheeri ah, fadlan tixraac tilmaamaha soo saaraha dhexdhexaadka ah.
2.3 Beerista caagagga
Balaastigga dhaqanka unuggu wuxuu u diyaarsan yahay qaabab kala duwan, cabbirro iyo dusha sare si ay ugu habboonaato codsiyada dhaqanka unugga ee kala duwan.Adeegso hagaha caagga ah ee dhaqanka unugga iyo hagaha weelka dhaqanka unugga ee hoose si ay kaaga caawiyaan doorashada caagga saxda ah ee codsigaaga dhaqanka unugga.
Arag dhammaan caagadaha dhaqanka unugga Thermo Scientific Nunc (isku xidhka xayeysiinta)
2.4 Heerkulka
Heerkulka ugu fiican ee dhaqanka unuggu wuxuu ku xiran yahay heerkul aad u weyn heerkulka jirka ee martida loo yahay kaas oo unugyadu ay go'doomiyeen, iyo xad yar oo ku saabsan isbeddelka anatomical ee heerkulka (tusaale, heerkulka maqaarku wuxuu ka hoosayn karaa kan murqaha lafaha. ).Dhaqanka unugga, kulaylku waa dhibaato ka sii daran kulaylka.Sidaa darteed, heerkulka gudaha ku-abuuraha ayaa inta badan la dejiyaa wax yar ka hooseeya heerkulka ugu fiican.
2.4.1 Heerkulka ugu wanaagsan ee khadadka unugyada kala duwan
Inta badan xadadka unugga dadka iyo naasleyda waxaa lagu hayaa 36°C ilaa 37°C si ay u koraan ugu fican.
Unugyada cayayaanka waxaa lagu beeraa 27 ° C si ay u koraan ugu fiican;Waxay u koraan si tartiib tartiib ah heerkul hoose iyo heerkul u dhexeeya 27 ° C iyo 30 ° C.In ka badan 30 ° C, tamarta unugyada cayayaanka ayaa hoos u dhacda, xitaa haddii ay ku soo noqdaan 27 ° C, unugyadu ma soo kabsanayaan.
Xadhkaha unugyada avianku waxay u baahan yihiin 38.5°C si ay u gaadhaan korriinka ugu sarreeya.Inkasta oo unugyadan lagu hayn karo 37°C, si tartiib ah ayay u koraan.
Xadhkaha unugyada ee ka soo jeeda xayawaanka dhiigga qabow (sida amfibiyaanka, kalluunka biyaha qabow) waxay u dulqaadan karaan heerkul ballaaran oo u dhexeeya 15 ° C ilaa 26 ° C.
Waqtiga boostada: Febraayo-01-2023